dld-diagnostika EA611/96說明書

Calretinin ELISA

酶免疫法定量測定血漿和血清中鈣視網膜蛋白

1.試驗的介紹和原理

一段時間以來，世界上超過55個國家禁止生產和使用石棉。然而，石棉相關癌癥——主要是惡性肺癌和間皮瘤——的數量仍然很高。

由于這種疾病的潛伏期很長，而且一些國家正在生產和應用石棉，預計不會有實質性的改善。早期發(fā)現(xiàn)腫瘤——最好是在沒有臨床癥狀的階段——可能會提高治愈治療的機會。DLD Diagnostika GmbH與德國社會意外保險預防和職業(yè)醫(yī)學研究所（波鴻魯爾大學（IPA）的科學家合作，開發(fā)了一種有前途的方法，該方法基于鈣視網膜蛋白作為血漿和血清樣本中早期檢測（尤其是間皮瘤）的生物標記物。目前，鈣視網膜蛋白是檢測間皮瘤的最佳標記物之一。

calretinin ELISA是一種利用純化兔多克隆抗體的夾心酶免疫分析法。在培養(yǎng)過程中，稀釋患者樣本中的鈣視網膜蛋白與固定在微量滴定板孔表面的鈣視網膜蛋白抗體（捕獲抗體）結合。清洗步驟后，添加生物素化鈣視網膜蛋白抗體（檢測抗體），該抗體與患者樣本中捕獲的鈣視網膜蛋白結合。在第二個洗滌步驟后，加入共軛鏈霉親和素過氧化物酶，與生物素化檢測抗體特異性結合。第三步洗滌后，酶的結合量——相當于鈣視網膜蛋白的量——通過底物四甲基本甲啶（TMB）的周轉進行量化。

在酶反應過程中，會產生藍色染料。加入硫酸會停止反應，使溶液變黃。使用微量滴定板讀取器在450 nm（參考波長在570 nm和650 nm之間）下測量樣品的消光度，并使用分析的標準品和對照品計算鈣視網膜蛋白的濃度。

2.注意事項

? 僅供體外使用。

? 應使用一次性手套和安全眼鏡。

? 本試劑盒中使用的所有人類來源試劑均經過HIV I/II抗體、HCV和HBsAg檢測，結果為陰性。然而，由于沒有任何測試方法可以*保證不存在傳染源，因此這些試劑應作為潛在的生物危險物質處理。

? 用于制備試劑盒的動物源性材料來自經認證的健康動物，但這些材料應被視為具有潛在傳染性。

? 該試劑盒的某些組件含有危險試劑。這些部件標有適當的危險標簽。

3.儲存和穩(wěn)定性

到達后，將試劑盒儲存在2-8°C的溫度下。一旦打開試劑盒，試劑盒將保持穩(wěn)定，直至到期。有關制備試劑的穩(wěn)定性，請參閱試劑的制備。不要使用超過套件標簽上顯示的有效期的組件。不要在單個分析中混合不同批次的任何試劑盒成分。

需要但未提供的其他材料和設備：

? 移液管15、50、60和100µl

? 軌道振動篩

? 多通道移液管或微孔板清洗裝置

? Eppendorf Multipette（或類似設備）

? 微孔板光度計（450 nm）

? 離心機（2500克）

? 蒸餾水

5.樣本收集和儲存

可使用EDTA血漿和血清進行檢測。

EDTA血漿和血清

應使用EDTA血漿和血清。溶血和血脂樣本

不應使用。

樣品可在2-8°C下儲存12小時。對于更長的儲存時間（最多24個月），樣品必須在-20°C下冷凍。應避免重復冷凍和解凍樣品。