advancedbiomatrix SpongeCol說明書

產品描述

SpongeCol ® 是一種具有互穿、柱狀多孔結構結構的膠原蛋白海綿。 SpongeCol ® 含有*的柱狀多孔網絡，允許細胞和營養物質*通過互穿孔流動，并為細胞附著、生長和遷移提供更大的表面積。  

SpongeCol ® 由高度純化的 I 型膠原蛋白組成，最能支持細胞的附著、增殖和功能。膠原蛋白輕微交聯，可提高短期和長期組織培養的機械強度和耐久性，但長期仍可生物降解。孔的直徑范圍為 100 至 400 微米，平均直徑約為 200 微米。膠原盤的直徑約為 4 毫米或 21 毫米，厚 1.5 毫米。海綿圓盤適合 96 孔（4 毫米圓盤）或 12 孔（21 毫米圓盤）培養板或用于流動灌注的衛生魯爾接頭。每個包裝包含 25 (4 mm) 或 5 (21 mm) 膠原蛋白海綿盤。

本產品經過最終滅菌，即可使用。

A. 準備和播種：

注意：細胞附著在海綿上通常是組織培養中最關鍵的一步。溫度、pH、氣體交換和細胞濃度會影響附著速率和效率。接種率取決于培養的細胞類型。

1. 在層流工作站中無菌地從包裝中取出海綿盤。

2. 使用無菌儀器將海綿小心地放入 12 孔（21 毫米海綿）或 96 孔（4 毫米海綿）組織培養板的孔中。轉移時小心不要損壞海綿。建議使用未經處理的組織培養塑料器皿。
   注意：組織包被的塑料器皿可能需要涂有瓊脂糖，以防止細胞附著在塑料上而不是海綿上。

3. 以所需濃度（1×10 4  – 1×10 5 個 細胞/mL）懸浮細胞，并在放置在孔中的海綿頂部分配足夠體積的細胞溶液。注意：另一種方法是將細胞懸浮在中和的膠原蛋白溶液中（例如 PureCol® I 型膠原蛋白目錄 #5005-100ML 或 PureCol® EZ Gel 目錄 #5074-35ML）。在放置在井中的海綿頂部分配膠原蛋白/細胞溶液。

4. 轉移到 37oC 培養箱中約 1 – 2 小時，以允許初始細胞附著。

5. 1 – 2 小時后，從培養箱中取出培養板并檢查細胞附著情況。可能需要額外的測試來優化細胞附著在海綿上的時間。檢查細胞的形態。細胞粘附和擴散將決定附著時間。

6. 一旦細胞充分附著在海綿上，增加每個孔的最終體積以*覆蓋并為培養系統提供足夠的培養基。

B. 更換媒體：

1. 在初始播種后 12 到 24 小時更換培養基。變化的頻率將取決于細胞類型、細胞附著效率、培養物可利用的培養基營養物的 pH（保持在 pH 7.0 至 7.4）利用率。與 2D 培養系統相比，可能需要更頻繁地更換培養基。

C. 細胞的收獲：

注意：蛋白酶消化是從海綿中釋放細胞的標準方法。細胞與膠原海綿的附著強度因細胞系而異。酶濃度和消化時間將根據酶的活性和細胞的匯合度而變化。膠原酶和/或胰蛋白酶可能是優選的方法。

1. 用 EDTA-PBS 清洗海綿可能有助于蛋白酶消化。添加足夠的體積以覆蓋海綿。

2. 從井中吸出 EDTA-PBS 溶液。

3. 向孔中加入足夠的解離溶液以*覆蓋海綿。

4. 轉移到 37oC 培養箱中。定期檢查細胞脫落是否有細胞脫落。

5. 一旦細胞*分離，取出細胞并分配到離心管中。

6. 根據需要離心細胞。